Amidasa (AMD)
Entzimak:Katalizatzaile biologiko makromolekularrak dira, entzima gehienak proteinak dira
Amidasa:Hainbat amida alifatiko eta aromatiko endogenoen eta arrotzen hidrolisia katalizatzea azilo talde bat uretara transferituz azido askeak eta amoniakoak ekoiztuz.Azido hidroxamikoak eta beste azido organiko batzuk sendagai gisa oso erabiliak dira, hazkuntza-faktoreen, antibiotikoen eta tumoreen inhibitzaileen osagai direlako.Amidasak R motako eta S motako azilasetan banatu daitezke, katalizatzailearen estereoselektibitatearen arabera.
Amideen hidrolisia katalizatzeaz gain, amidasak azil transferentzia erreakzioak ere kataliza ditzake hidroxilamina bezalako kosubstratuen aurrean.
Iturri ezberdinekin amidasak substratu espezifikotasun desberdinak dituzte, horietako batzuek amida aromatikoak hidroliza ditzakete, batzuek amida alifatikoak soilik hidroliza ditzakete eta beste batzuek α-edo ω-amino-amidak hidroliza ditzakete.Amina gehienek jarduera katalitiko ona dute amida azikliko edo aromatiko soiletarako soilik, baina aromatiko konplexuetarako, amida heteroziklikoek, batez ere orto-ordezkatzaileak dituzten amidek, aktibitate txikia dute orokorrean (entzima gutxi batzuek baino ez dituzte efektu katalitiko hobeak erakusten).
Mekanismo katalitikoa:
| Entzimak | Produktuaren Kodea | Produktuaren Kodea |
| Entzima hautsa | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | 19 amidasa multzo bat, 50 mg bakoitzeko 19 elementu * 50 mg / elementu edo beste kantitate bat |
| Emanaldi-kit (SynKit) | ES-AMD-1900 | 19 amidasa multzo bat, 1 mg bakoitzeko 19 elementu * 1 mg / item |
★ Substratu espezifikotasun handia.
★ Selektibitate kiral handia.
★ Bihurketa-eraginkortasun handia.
★ Azpiproduktu gutxiago.
★ Erreakzio-baldintza leunak.
★ Ingurumena errespetatzen duena.
➢ Entzimaren baheketa substratu espezifikoetarako egin behar da, substratuaren espezifikotasuna dela eta, eta xede-substratua efektu katalitiko onenarekin katalizatzen duen entzima bat lortu.
➢ Ez jarri inoiz kontaktu muturreko baldintzekin, hala nola: tenperatura altua, pH altua/baxua eta kontzentrazio handiko disolbatzaile organikoa.
➢ Normalean, erreakzio-sistemak substratua, tampon-disoluzioa (entzimaren erreakzio pH optimoa) izan behar du.Hidroxilamina bezalako kosubstratuek azil transferentzia erreakzio sisteman egon beharko lukete.
➢ AMD azkena gehitu behar da erreakzio-sisteman, erreakzio pH eta tenperatura optimoekin.
➢ AMD mota guztiek hainbat erreakzio-baldintza optimo dituzte, beraz, horietako bakoitza banan-banan gehiago aztertu behar da.
1. adibidea(1):
Amida-substratu desberdinen hidrolisi-jarduera
| Substratua | Jarduera espezifikoa μmol min-1mg-1 | Substratua | Jarduera espezifikoa μmol min-1mg-1 |
| Azetamida | 3.8 | ο-OH benzamida | 1.4 |
| Propionamida | 3.9 | p-OH benzamida | 1.2 |
| Laktamida | 12.8 | ο-NH2benzamida | 1.0 |
| Butiramida | 11.9 | p-NH2benzamida | 0,8 |
| Isobutiramida | 26.2 | ο-Toluamida | 0.3 |
| Pentanamida | 22.0 | p-Toluamida | 8.1 |
| Hexanamida | 6.4 | Nikotinamida | 1.7 |
| Ziklohexanamida | 19.5 | Isonikotinamida | 1.8 |
| Akrilamida | 10.2 | Pikolinamida | 2.1 |
| Metakrilamida | 3.5 | 3-Fenilpropionamida | 7.6 |
| Prolinamida | 3.4 | Indol-3-acetamida | 1.9 |
| Benzamida | 6.8 |
Erreakzioa 50 mM sodio fosfato buffer soluzio batean egin zen, pH 7,5, 70 ℃-tan.
| Amideak | Hidroxilamina | Hidrazina |
| Azetamida | 8.4 | 1.4 |
| Propionamida | 18.4 | 3.0 |
| Isobutiramida | 25.0 | 22.7 |
| Benzamida | 9.2 | 6.1 |
Erreakzioa 50 mM sodio fosfato buffer soluzio batean egin zen, pH 7,5, 70 ℃-tan.
Erlazionatutako erreaktiboen kontzentrazioa: amidak, 100 mM (benzamida, 10 mM);hidroxilamina eta hidrazina, 400 mM;entzima 0,9 μM.
2. adibidea(2):
3. adibidea(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al.Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et al.Prozesuaren Biokimika, 2015, 50 (8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et al.Kimika Bioorganikoa, 2017, Interneten eskuragarri 7.
